Paragangliomes, Métastases, Biomarqueurs, MicroARN, Stress oxydatif

Les paragangliomes (PGL) sont des tumeurs neuroendocrines rares et très vascularisées qui se développent aux dépens des systèmes nerveux sympathique et parasympathique. Environ 15% des PGL deviennent métastatiques et leur malignité est uniquement définie par l'apparition de métastases. A ce jour, la présence d'une mutation sur le gène SDHB constitue le principal facteur de risque génétique de malignité et de mauvais pronostic des PGL, et il n'existe aucun biomarqueur robuste utilisé en routine clinique à même de prédire leur malignité. Les microARNs (miR) sont de petits ARN non codants, régulateurs post transcriptionnels, capables d'éteindre l'expression d'un ou plusieurs gènes cibles. Il a été démontré que certains d'entre eux possèdent des caractéristiques d'oncogènes et qu'ils peuvent être sécrétés par les cellules. Deux études menées par mon équipe ont permis confirmer la surexpression des miR-21-3p, 96-5p, 182-5p, 183-5p et 483-5p dans les PGL métastatiques par rapport aux non métastatiques. Nous avons émis l'hypothèse que la surexpression de miR par les cellules tumorales pourrait modifier leur phénotype et le microenvironnement tumoral, favorisant l'apparition de métastases. Et que leur sécrétion pourrait en faire des biomarqueurs circulants pertinents pour le diagnostic de la malignité. L'objectif principal de mon projet de thèse était d'évaluer le potentiel de ces miR, ainsi que d'autres biomarqueurs, pour le suivi clinique des patients atteints de PGL afin d'identifier le premier biomarqueur prédicteur de malignité chez ces patients. Le second objectif était de caractériser l'influence des miR sur les cellules tumorales et d'identifier leurs cibles pour comprendre leurs mécanismes d'action, et ainsi pouvoir identifier de nouvelles cibles thérapeutiques. L'étude COMETE-TACTIC, une cohorte prospective comprenant 231 patients a permis de mettre en évidence l'intérêt d'effectuer un séquençage de l'ADN somatique, lorsque cela est possible, afin d'identifier le statut génétique de la tumeur, l'importance de la connaissance des statuts TERT et ATRX pour le suivit des patients, ainsi que l'utilité du miR-483-5p en tant que biomarqueur de prédiction de la malignité des PGL. Enfin, elle a également permis de souligner la robustesse de l'immunohistochimie SDHB et son intérêt pour la stratification des patients, ainsi que la complémentarité des données cliniques et des marqueurs biologiques. En parallèle de cette étude, la génération de lignées cellulaires délétées pour les miR du cluster 183-96-182 a permis de caractériser leur impact sur la migration des imCC Sdhb -/- et d'identifier Stmn1 comme une nouvelle cible potentielle de ces miR. La création de lignées CRISPR a également mené à la mise en évidence de l'aneuploïdie de ces cellules, caractéristique commune des cellules cancéreuses immortalisées, fréquemment retrouvée chez les PGL, qui a néanmoins complexifié les expériences effectuées avec ces cellules ainsi que l'analyse de leurs résultats. La mise en évidence de l'importance du miR-483-5p dans les métastases de PGL par l'étude COMETE-TACTIC nous a ensuite incité à approfondir les recherches. La caractérisation de son influence sur les cellules imCC WT et Sdhb -/- a montré son effet sur la migration et la prolifération de ces cellules. Ce résultat a été confirmé par le RNAseq, qui a également révélé l'impact du miR-483-5p sur l'expression des voies biologiques du stress oxydatif et du glutathion. L'approfondissement de ces recherches est actuellement en cours. L'ensemble de mes travaux de thèses ont donc permis de valider de nouveau biomarqueurs et d'initier leur mise en place en routine clinique ainsi que d'approfondir l'étude du rôle des microARN dans l'évolution métastatiques des PGL.