Globules rouges vacuolés, Splénectomie, Drépanocytose, Vacuoles, Genèse

Contexte : L'hyposplénisme affecte les sujets splénectomisés mais aussi les patients drépanocytaires. Les altérations des globules rouges (GR) sont des marqueurs précis de la fonction splénique. Les GR contenant des vacuoles (GRV) circulent en proportions élevées (20 à 70 %) dans le sang des sujets hypospléniques. En revanche, la proportion de GRV ne dépasse pas 5 % chez les sujets sains car les vacuoles sont éliminées des GR sans hémolyse par un processus spécifique à la rate appelé pitting. Bien que leur élimination par pitting soit bien établie, leur contenu et le mécanisme d'apparition ne sont pas totalement connus. Les vacuoles pourraient être des restes d'organites érythroblastiques ou être créées de novo en circulation. Notre projet vise à déterminer la genèse des vacuoles dans les GRV. Méthodes : Par une approche protéomique, les GR matures et les ghosts (GR dépourvus de protéines cytoplasmiques) de 5 sujets splénectomisés (avec >30 % de GRV) et 5 sujets témoins (<5 % de GRV) ont été étudiés par protéomique. Sur la base de ces résultats, deux marqueurs protéiques potentiels ont été sélectionnés pour l'immunofluorescence (LAMP1 et VDAC). Par la suite, 8 patients atteints de drépanocytose dans un programme d'échange ont été suivis avant et après transfusion. Les GR étaient marqués avec des anticorps anti-HbS et anti-VDAC ou LAMP1. Les GR HbAA transfusés ont été discriminés des GR HbSS par marquage de HbS. Les GRV avec des vacuoles marquées ont été quantifiés. Résultats : Par protéomique, nous avons identifié 31 protéines augmentées ou apparues à la fois dans les GR matures et dans les ghosts des sujets splénectomisés. Parmi ces 31 protéines, 8 étaient d'origine vésiculaire, 3 étaient liées au réticulum endoplasmique et 20 aux mitochondries. Des immunofluorescences ont été réalisées avec une protéine lysosomale (LAMP1) et une protéine mitochondriale (VDAC), toutes deux surexprimées chez les sujets splénectomisés. Les GR des sujets splénectomisés et des témoins ont été marqués avec des anticorps spécifiques de ces protéines. Alors que les vacuoles des témoins n'étaient jamais marquées, une moyenne de 30 % et 20 % des GRV avaient au moins une vacuole marquée par LAMP1 ou VDAC (N=11). Les GR de patients drépanocytaires transfusés, possédant leurs propres GR HbSS mais aussi des GR HbAA provenant de donneurs (avec des GRV <5%), ont été marqués des anticorps anti-HbS (pour discrimer les deux populations de GR) puis anti-LAMP1 ou VDAC. Nous avons pris avantage de cette double population pour étudier l'apparition des GRV dans les GRV circulants. Dans les GR HbAA transfusés, 5,5 % des GRV avaient des vacuoles positives pour LAMP1 immédiatement après la transfusion et 2 % un mois plus tard. Les proportions étaient de 3,5 % et 2 % avec l'anticorps anti-VDAC. Dans les GR HbSS, 74 % et 62 % des GRV avaient des vacuoles positives pour LAMP1, et 68 % et 46 % pour VDAC, respectivement. Dans les GR HbSS endogènes, il n'y avait pas d'augmentation de GRV et de vacuoles positives pour LAMP1 et VDAC. En revanche, dans les GR HbAA transfusés, il y avait une augmentation de 2,42 fois des GRV un mois après la transfusion, mais les proportions de vacuoles positives pour LAMP1 et VDAC étaient stables. L'augmentation des proportions de vacuoles visibles en DIC dans les GR HbAA transfusés est très majoritairement due à l'apparition de vacuoles négatives pour LAMP1 et VDAC, ce qui suggère fortement une genèse de vacuoles non liée à l'érythropoïèse. Conclusion : Une proportion de vacuoles apparaît de novo dans les GR HbAA transfusés des patients hypospléniques, tandis qu'une proportion est marquée avec les protéines lysosomales et mitochondriales LAMP1 et VDAC, ce qui suggère qu'elles sont des vestiges d'organites érythroblastiques. La persistance vestigiale et l'apparition ex-nihilo des vacuoles semblent coexister.