Corps nucléaires PML, Leucémie aigue promyélocytaire, Arsenic, Compartiments cellulaires sans membranes, Assemblage de complexes protéiques, Séparation de phase liquide-liquide, Sumoylation

PML (ProMyelocytic Leukemia) est une protéine qui structure la coque d'organelles sans membranes, nommés corps nucléaires PML (CNP). Les CNP recrutent un grand nombre de protéines partenaires et contrôlent leurs modifications post-traductionnelles, en particulier leur sumoylation, régulant leur activité. La protéine PML est impliquée dans de nombreux processus biologiques, en particulier la sénescence, l'apoptose ou le métabolisme, mais le rôle des CNP en tant que tels reste à démontrer. Les CNP sont désorganisés par l'action de l'oncoprotéine PML/RARa dans un type de leucémie rare, la leucémie aiguë promyélocytaire (LAP). La combinaison d'acide rétinoïque et de trioxyde d'arsenic guérit les malades, sans chimiothérapie additionnelle. De façon déterminante, l'arsenic peut se lier directement à PML, induire le réassemblage des CNP et l'activation d'un programme de sénescence, bloquant l'auto-renouvèlement des cellules leucémiques et conduisant à la guérison des patients. Cependant, le mécanisme par lequel la liaison de l'arsenic sur PML provoque cet assemblage demeure inconnu. Les CNP sont également perdus dans d'autres cancers et PML est impliquée dans certaines maladies neurodégénératives, ce qui en fait une cible thérapeutique de choix. Au cours de ma thèse, j'ai cherché à identifier les mécanismes régulant l'assemblage des CNP, en particulier en réponse à l'arsenic, et le lien entre la dynamique d'assemblage des CNP et leur fonction. Les résultats que j'ai obtenus indiquent que les CNP présentent des caractéristiques d'organelles sans membrane s'assemblant selon un processus de séparation de phase liquide-liquide, mais avec certaines spécificités, comme celle d'être très structurés en core-shell. L'étude d'un domaine doigt de zinc de PML, la boite B2, retrouvé muté chez les patients LAP résistants à l'arsenic, a révélé son rôle central dans la dynamique d'assemblage des CNP. Mon travail de thèse a permis de montrer, par différentes techniques et expertises que la boite B2 contrôle l'assemblage dynamique des CNP en formant des homo-trimères. Ces derniers sont coordonnés par des interactions, de type hydrophobe, faibles et réversibles grâce à une hélice α présente dans ce domaine. En outre, ces interactions positionnent au cœur du trimère une cystéine libre de l'hélice qui joue une rôle central en contrôlant la dynamique d'assemblage des CNP. C'est sur cette triade de cystéines accessibles que l'arsenic vient se loger, transformant des liaisons faibles en liaisons covalentes. L'arsenic fige ainsi les trimères de boite B2, induisant une transition de phase des CNP vers des caractéristiques de type gel. Des résultats préliminaires montrent que la perte de l'auto-renouvèlement des cellules transformées par l'oncoprotéine PML-RARα induit par l'arsenic dépend de cette triade de cystéine. Ainsi, en reliant stéréo-sélectivité et dynamique intracellulaire, nous avons élucidé la toute première étape du mécanisme d'action ciblée de l'arsenic sur PML, ouvrant la voie au développement clinique de nouvelles molécules, basé sur la structure, pour activer de la biogenèse des CNP. En collaborant au développement de corps nucléaires PML artificiels in cellulo, dont nous pouvons contrôler l'assemblage par séparation de phase liquide-liquide, nous cherchons à comprendre par des approches ascendantes les liens entre la structure en core-shell des CNP, leur dynamique d'assemblage et leurs fonctions de sumoylation/dégradation. Mon travail de thèse ouvre également de nouvelles perspectives pour comprendre comment les réactions redox régulent la biogenèse des CNP. L'ensemble de ces travaux présente un intérêt pour la mise au point de nouvelles thérapeutiques où l'induction de la formation des CNP et/ou de leur dégradation peut améliorer le pronostic.